大鼠高敏甲狀腺素(U-T4)elisa試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：大鼠高敏甲狀腺素(U-T4)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中高敏甲狀腺素(U-T4)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠高敏甲狀腺素(U-T4)水平。用純化的大鼠高敏甲狀腺素(U-T4)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入高敏甲狀腺素(U-T4)再與HRP標記的U-T4抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高敏甲狀腺素(U-T4)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中大鼠高敏甲狀腺素(U-T4)濃度。

試劑盒組成

120倍濃縮洗滌液30ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(18pmol/L)0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為12pmol/L，8pmol/L，4pmol/L，2pmol/L，1pmol/L)。

2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.封板膜只限次性使用，以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

大鼠高敏甲狀腺素(U-T4)ELISA試劑盒使用說明書

檢測范圍：

0.7pmol/L-15pmol/L

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1.試劑盒保存：;2-8℃。

2.有效期：6個月